Определение количества форменных элементов крови
Рубрика: Лабораторные исследованияКровь набирают в особые смесители, которые представляют собой капиллярные пипетки, заканчивающиеся небольшим стеклянным резервуаром с небольшой свободно лежащей стеклянной бусинкой. Пипетка смесителя для счета красных кровяных телец посредине имеет метку 0,5, в конце— 1, а где оканчивается резервуар — 101. Пипетка смесителя для лейкоцитов имеет такие же . деления, по только резервуар ее меньше и в конце его стоит метка 11.
Для счета эритроцитов кровь разбавляют 3% раствором поваренной соли. В качестве разбавляющей жидкости для счета лейкоцитов пользуются 5% раствором уксусной кислоты, которая растворяет эритроциты и совершенно не изменяет лейкоцитов.
Для счета эритроцитов берут смеситель с большим резервуаром, насасывают кровь до деления 0,5 или 1 (лучше брать кровь до 0,5), обтирают кончик смесителя ваткой и сразу опускают смеситель в раствор поваренной соли и насасывают его до метки 101. Затем зажимают концы смесителя пальцами одной руки и встряхивают: бусинка в резервуаре равномерно распределяет форменные элементы.
Для счета лейкоцитов берут смеситель с меньшим раствором, насасывают кровь до метки 1, обтирают кончик смесителя ваткой и затем набирают до метки 11 раствор уксусной кислоты. По окончании насасывания раствора смеситель хорошенько встряхивают, зажав его концы.
Форменные элементы крови можно считать только под микроскопом в специальной счетной камере. Наиболее часто пользуются . счетной камерой Тома-Цейсса, состоящей из толстого предметного стекла, на которое наклеен стеклянный кружок. Дно камеры (кружка) представляет тончайшую сетку, состоящую из 16 больших квадратов, из которых каждый в свою очередь разделен на 16 маленьких квадратиков.
Каждый большой квадрат, который под микроскопом занимает почти все поле зрения, отделен от другого тремя тончайшими ли- . ниями. Сторона маленького квадратика равна 1/20 мм, а площадь, следовательно, 1/400мм2 Камера окружена рамкой, которая на ОД мм выше сетки. На рамку кладется толстое шлифованное стекло.
Расстояние между сеткой и стеклом равняется 0,1 мм; следовательно, объем одного деления на сетке составит 7юХ 1!ш XU 000 мм3
Кружок от рамки отделяется небольшим углублением, куда может вылиться излишек крови, нанесенной на сетку.
Наиболее удобной является камера Предтеченского-Ключарева. На предметном стекле прикреплены две стеклянные пластинки, служащие опорой для покровного стекла. Между ними находится средняя пластинка, плоскость которой на 0,1 мм ниже предыдущих. Эта пластинка разделена на две части поперечным желобком. На каждую половинку средней пластинки нанесено по одной сетке, состоящей из 100 больших квадратиков. Величина больших и малых квадратиков такая же, как и в камере Тома-Цейсса.
Камера, углубление, рамка и покровное стекло должны быть совершенно чисты и сухи. Прежде чем пустить разбавленную кровь на сетку, нужно снова несколько раз встряхивать смеситель, как указано выше, чтобы форменные элементы распределялись равномерно. Затем выпускают из смесителя 1—2 капли на фильтровальную бумагу и лишь после этого наносят небольшую капельку раствора на сетку. Капелька должна быть только такою объема, чтобы покрыть всю сетку. Когда капля нанесена, ее осторожно, чтобг не образовалось воздушных пузырей, покрывают покровным стеклом, котороо плотно прижимают к рамке.
В камере Предтеченского-Ключарева сначала плотно накладывается покровное стекло, а затем капля разведенной крови, висящая на конце смесителя, подносится сбоку к щели между сеткой и покровным стеклом. Жидкость равномерно распределяется между сеткой и покровным стеклом, а излишек ее стекает в поперечный желобок.
Для более или менее точного подсчета краснЬгх кровяных телец достаточно сосчитать их в 5 больших или 80 маленьких квадратиках. Счет производят в определенном порядке. Удобнее всего начинать с верхнего левого маленького квадратика. Считают все эритроциты, расположенные внутри квадратика, а затем на верхней и левой границе. После этого переходят к следующим квадратикам, и так сосчитывают количество эритроцитов во» всем большом квадрате. После подсчета эритроцитов во всем большом квадрате полученное число записывают и препарат подвигают под микроскопом на следующий большой квадрат. Таким образом сосчитывают эритроциты в 5 больших квадратах. Предположим, что в 5 больших или 80 малых квадратах мы насчитали448 эритроцитов; следовательно, в одном малом квадрате их будет 448/80. Выше было указано, что объем малого квадратика равен 4/4000 мм8, значит в 1 мм5 эритроцитов 4 000 раз больше, т. е. (448/80)*4000. Кровь была разбавлена в 200 раз, следовательно, в действительности эритроцитов должно быть в 200 раз больше, чем мы сосчитали: (448*4000*200)/80=4480000
Это и будет число, указывающее количество красных кровяных телец в 1 мм3 исследуемой крови. Практически не нужно произвэдить всех указанных арифметических вычислений; достаточно к сосчитанному числу эритроцитов прибавить четыре нуля, чтобы получить количество эритроцитов в 1 мм3.
Для подсчета белых кровяных телец препарат готовится таким же образом. Так как лейкоцитов гораздо меньше и на большой квадрат их приходится всего 3—4, то нужно сосчитывать их в большем количестве квадратов, по крайней мере в 25.
Если пользоваться камерой Тома-Цейсса, в которой всего 16 больших квадратов, приходится производить подсчет 2 раза, а при более точном подсчете и больше.
Поэтому для счета, особенно лейкоцитов, удобнее пользоваться камерой Предтеченского-Ключарева.
Вычисление производится аналогично подсчету эритроцитов. Предположим, что в 25 больших квадратах или 400 (25×16) малых было сосчитано 74 лейкоцита. На один малый квадрат приходится 74/400 лейкоцитов. Полагая, что объем одного малого квадрата равен 1/4000 мм3 и кровь для счета лейкоцитов была разбавлена в 10 раз, получим количество лейкоцитов в 1 мм3: (74*4000*10)/400=7400
Практически следует к сосчшанному числу лейкоцитов прибавить два нуля.
